Health & Environmental Research Online (HERO)


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5755235 
Journal Article 
Dosage de l'hémoglobine plasmatique dans les plasmas frais à utilisation thérapeutique: par la méthode à la T.M.B. (3,3′–5,5 tétraméthylbenzidine) 
Pillier-Loriette, C; Wingerter, P; Gerota, J; Schenmetzler, C; Reviron, J; Aymard, P 
1983 
0 
Revue Française de Transfusion et Immuno-hématologie
ISSN: 0338-4535 
26 
3 
299-312 
Resume Les arrêtés ministériels ont fixé à 50 mg/l (3,08 μmol/l) le taux maximum d'hémoglobine plasmatique dans les PFC standards avant leur congélation. Aucune méthode de référence pour le dosage de l'hémoglobine n'ayant été indiquée, nous avons repris et adapté une technique où l'activité pseudo-peroxydasique de l'hémoglobine est révélée par un chromogène non carcinogénique la 3, 3′, 5, 5′ tétraméthylbenzidine (dérivé de la benzidine). Une gamme étalon de 4 points est effectuée pour chacun des plasmas à tester, limitant ainsi les interférences possibles au niveau de l'activité pseudo-peroxydasique de l'hémoglobine par les autres protéines plasmatiques. Dans notre étude cette technique a été comparée sur le plan pratique aux méthodes :--extractive de Vanzetti [8]dont l'inconvénient majeur réside dans l'utilisation de solvants inflammables et d'un chromogène carcinogénique ;--de préincubation du plasma en présence d'eau oxygénée de Standefer [10] qui permet de mettre en évidence les interférences protéiques mais est peu précise du fait de l'utilisation d'un seul point étalon et de l'ignorance d'un phénomène possible de saturation du chromogène. Le taux fixé par les arrêtés ministériels est supérieur :--au taux trouvé par notre méthode, sur 118 échantillons provenant d'unités de plasma frais obtenu par double centrifugation du sang total recueilli sur CPD ;--ainsi qu'à ceux, également déterminés par notre méthode, trouvés sur des échantillons plasmatiques provenant de dons sur séparateur à flux continu (IBM 2997) et discontinu (Hc 50) recueillis sur ACD-A et ACD-A. A 16 (cf. Tableau IV). Notre méthode permet de déterminer avec précision de faibles taux d'hémoglobine plasmatique. Elle est simple, peu coûteuse et facile à mettre en pratique dans un centre de Transfusion Sanguine. Summary The maximum level of plasma hemoglobin in standard fresh frozen plasma before freezing has been fixed at 50 mg/l by french regulations. As no reference method is specified by the standards, we have adapted a technique where pseudo-peroxydasic activity of the hemoglobin is revealed by 3, 3′ – 5, 5′, tetramethylbenzidine, a non carcinogenic chromogen derivate from benzidine. A 4 points reference scale is plotted for each plasma to be tested, thus reducing eventual interferences between pseudo-peroxydasic activity of the hemoglobin and other plasma proteins. We compare our modified technique to other existing ones:--Vanzetti's extraction technique [8]whose main drawbacks are the use of flammable solvents and carcinogenic chromogen.--Standefer's technique [10]involving plasma preincubation in H2O2 solution, which reveals protein interferences but is imprecise as it relies on only one reference point and does not show whether chromogen saturation is present. The level fixed by regulations is higher than the mean level indicated by our method, based on 118 samples of fresh plasma obtained by double centrifugation of whole blood collected on CPD as anticoagulant. It is also higher than the level indicated by the same method for plasma samples drawn from continuous or discontinuous flow cytapheresis (IBM 2997 ; Haemonetics V 50) using ACD - A or ACD - AA 16 as anticoagulant. Our method measures with precision low levels in plasma. Furthermore it is cheap, simple and easy to run in a blood transfusion center.